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微丝骨架介导猪血凝性脑脊髓炎病毒入侵神经细胞的作用及其机制

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微丝骨架介导猪血凝性脑脊髓炎病毒入侵神经细胞的作用及其机制
论文目录
 
中文摘要第1-8页
Abstract第8-17页
英文缩写词表第17-18页
前言第18-19页
第一篇 文献综述第19-41页
第1章 猪血凝性脑脊髓炎病毒研究进展第19-25页
  1.1 病原学第19-22页
  1.2 PHEV的致病特征第22页
  1.3 PHEV致病机制研究进展第22-25页
第2章 F-actin骨架与病毒感染第25-37页
  2.1 F-actin骨架的生物学特性第25-28页
  2.2 F-actin骨架调控蛋白第28-30页
  2.3 F-actin骨架与病毒的关系第30-37页
    2.3.1 F-actin骨架与病毒入侵第30-32页
    2.3.2 F-actin骨架与病毒胞内运输第32-33页
    2.3.3 F-actin骨架与病毒大分子生物合成第33页
    2.3.4 F-actin骨架与病毒装配、释放第33-34页
    2.3.5 F-actin骨架与病毒细胞间传播第34-37页
第3章 F-actin骨架作为抗病毒靶标研究进展第37-41页
  3.1 抑制F-actin骨架聚合的解聚剂第37-38页
    3.1.1 细胞松弛素第37-38页
    3.1.2 Latrunculins第38页
    3.1.3 Swinholide第38页
  3.2 抑制F-actin骨架解聚的稳定剂第38-39页
    3.2.1 Jasplakinolide第38-39页
    3.2.2 Chondramides第39页
  3.3 以F-actin骨架调控因子为靶标的抗病毒药物第39-41页
第二篇 研究内容第41-113页
第1章 PHEV感染诱导N2a细胞肌动蛋白细胞骨架重塑第41-57页
  1.1 材料与试剂第41-45页
    1.1.1 细胞及病毒第41页
    1.1.2 N2a细胞培养第41-42页
    1.1.3 主要仪器第42页
    1.1.4 溶液及试剂的配制第42-45页
  1.2 实验方法第45-51页
    1.2.1 N2a细胞培养第45页
    1.2.2 PHEV感染N2a细胞第45页
    1.2.3 F-actin荧光染色方法的建立第45-46页
    1.2.4 间接免疫荧光技术检测细胞 F-actin 骨架变化及病毒分布第46页
    1.2.5 流式细胞术检测PHEV感染后N2a细胞F-actin变化情况第46页
    1.2.6 细胞总 RNA 提取及反转录反应第46-48页
    1.2.7 质粒构建第48页
    1.2.8 实时定量PCR方法(Quantitative Real-time PCR, q RT-PCR)检测PHEV进入第48-49页
    1.2.9 细胞总蛋白提取第49页
    1.2.10 Western blot检测PHEV表达量第49-50页
    1.2.11 Cyto D对PHEV进入N2a细胞影响的检测第50页
    1.2.12 病毒生长曲线分析第50页
    1.2.13 图像和数据统计分析第50-51页
  1.3 实验结果第51-55页
    1.3.1 筛选F-actin荧光染色的最佳条件第51页
    1.3.2 PHEV感染诱导N2a细胞F-actin骨架重塑第51-53页
    1.3.3 病毒进入与F-actin骨架变化的相关性第53-54页
    1.3.4 F-actin重塑影响PHEV对神经细胞的侵袭第54-55页
  1.4 讨论第55-56页
  1.5 小结第56-57页
第2章 Cofilin活性对PHEV进入N2a细胞的影响第57-73页
  2.1 材料与试剂第57-59页
    2.1.1 细胞及载体第57页
    2.1.2 主要试剂第57-58页
    2.1.3 主要仪器第58页
    2.1.4 溶液及试剂的配制第58-59页
  2.2 实验方法第59-61页
    2.2.1 Cofilin过表达载体构建第59-60页
    2.2.2 Cofilin和LIMK si RNA设计第60页
    2.2.3 N2a细胞转染及接种病毒第60-61页
  2.3 实验结果第61-70页
    2.3.1 PHEV感染诱导cofilin活性动态改变第61-62页
    2.3.2 Cofilin活性影响病毒进入细胞第62-66页
    2.3.3 Cofilin参与病毒诱导的细胞膜皱褶形成第66-68页
    2.3.4 Cofilin调控激酶LIMK影响病毒进入细胞第68-70页
  2.4 讨论第70-71页
  2.5 小结第71-73页
第3章 F-actin介导PHEV入侵N2a细胞的分子机制研究第73-95页
  3.1 材料与试剂第73-75页
    3.1.1 细胞及载体第73页
    3.1.2 主要试剂第73-74页
    3.1.3 主要仪器第74页
    3.1.4 溶液及试剂的配制第74-75页
  3.2 实验方法第75-77页
    3.2.1 药物对细胞毒性的测定第75页
    3.2.2 药物对PHEV进入和cofilin活性影响检测第75页
    3.2.3 原核表达载体构建与蛋白表达第75-76页
    3.2.4 GST-pull down检测Rac 1 和Cdc 42 GTPases活性第76-77页
    3.2.5 图像和数据统计分析第77页
  3.3 实验结果第77-92页
    3.3.1 RTKs不参与PHEV进入和cofilin磷酸化第77-78页
    3.3.2 Integrin α5β1 参与PHEV进入和cofilin磷酸化第78-80页
    3.3.3 Integrin α5β1 通过FAK信号促进PHEV进入细胞及cofilin磷酸化第80-82页
    3.3.4 Src不参与PHEV进入细胞和cofilin磷酸化第82-83页
    3.3.5 Rac 1 和Cdc 42 GTPases参与PHEV进入细胞和cofilin磷酸化第83-86页
    3.3.6 PAK 1 作为Cdc 42 / Rac 1 的下游效应子参与cofilin磷酸化第86-88页
    3.3.7 Integrin α5β1 也可通过PI3K信号促进PHEV进入细胞及cofilin磷酸化第88-89页
    3.3.8 Rho A参与PHEV进入N2a细胞和cofilin磷酸化第89-90页
    3.3.9 ROCK作为Rho A的下游效应子参与cofilin磷酸化第90-92页
  3.4 讨论第92-94页
  3.5 小结第94-95页
第4章 F-actin介导PHEV入侵分子机制的体内验证第95-113页
  4.1 材料与试剂第95-96页
    4.1.1 实验动物第95页
    4.1.2 主要试剂第95-96页
    4.1.3 主要仪器第96页
    4.1.4 溶液及试剂的配制第96页
  4.2 实验方法第96-99页
    4.2.1 PHEV感染小鼠模型的建立第96-97页
    4.2.2 小鼠静脉注射ATN-161 实验第97页
    4.2.3 石蜡切片制备第97-98页
    4.2.4 H&E染色观察小鼠大脑皮质损伤第98页
    4.2.5 间接免疫荧光法检测小鼠大脑皮质病原分布第98页
    4.2.6 图像和数据统计分析第98-99页
  4.3 实验结果第99-109页
    4.3.1 Integrin α5β1 在PHEV感染小鼠大脑皮质中表达量增加第99-100页
    4.3.2 Integrin α5β1 抑制剂ATN-161 减轻PHEV感染小鼠的临床症状第100-104页
    4.3.3 ATN-161 抑制PHEV在小鼠大脑皮质中增殖第104-105页
    4.3.4 Integrin α5β1 下游信号通路在PHEV感染小鼠大脑皮质中的激活情况第105-107页
    4.3.5 ATN-161 降低PHEV感染小鼠大脑皮质中FAK信号通路活化第107-109页
  4.4 讨论第109-110页
  4.5 小结第110-113页
结论第113-115页
参考文献第115-133页
导师简介第133-135页
作者简介第135-137页
攻读博士期间发表的学术论文及其他成果第137-139页
致谢第139页

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