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弓形虫Chinese I株BIN3蛋白的生物学特性研究

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弓形虫Chinese I株BIN3蛋白的生物学特性研究
论文目录
 
中文摘要第1-9页
abstract第9-17页
英文缩写词语表第17-18页
前言第18-20页
第一篇 文献综述第20-36页
第1章 弓形虫研究进展第20-30页
  1.1 弓形虫生活史第20-21页
  1.2 弓形虫病流行病学第21-22页
  1.3 弓形虫基因操作技术第22-23页
  1.4 弓形虫病诊断技术第23-24页
  1.5 弓形虫病治疗药物第24-25页
  1.6 弓形虫病疫苗抗原第25-30页
第2章 弓形虫基因型第30-36页
  2.1 世界弓形虫基因型流行特点第30-31页
  2.2 中国弓形虫基因型流行特点第31-36页
第二篇 研究内容第36-116页
第1章 BIN3 基因生物信息学分析第36-52页
  1.1 材料第36页
    1.1.1 BIN3基因序列第36页
    1.1.2 主要软件第36页
    1.1.3 主要在线数据库和在线软件第36页
  1.2 方法第36-37页
    1.2.1 BIN3 蛋白的基本理化性质分析第36-37页
    1.2.2 预测BIN3 蛋白在虫体细胞内的分布区域第37页
    1.2.3 分析BIN3 蛋白的翻译后修饰第37页
    1.2.4 分析BIN3 蛋白的抗原表位第37页
    1.2.5 分析BIN3 蛋白二级结构第37页
  1.3 结果第37-48页
    1.3.1 BIN3 蛋白的理化性质第37-41页
    1.3.2 BIN3 蛋白的翻译后修饰分析第41-43页
    1.3.3 分析BIN3 蛋白的抗原表位第43-46页
    1.3.4 分析BIN3 蛋白二级结构第46-48页
  1.4 讨论第48-50页
  1.5 小结第50-52页
第2章 抗弓形虫BIN3 单克隆抗体制备第52-70页
  2.1 材料第52-54页
    2.1.1 主要实验材料第52页
    2.1.2 主要试剂第52页
    2.1.3 主要仪器第52-53页
    2.1.4 主要溶液配制第53-54页
  2.2 方法第54-61页
    2.2.1 弓形虫Chinese I基因型BIN3 蛋白原核表达第54-59页
    2.2.2 BIN3 蛋白单克隆抗体的制备与纯化第59-61页
  2.3 结果第61-67页
    2.3.1 弓形虫Chinese I基因型BIN3 基因的克隆第61-63页
    2.3.2 BIN3 蛋白重组蛋白质的表达和纯化第63-65页
    2.3.3 单抗制备结果第65-66页
    2.3.4 Western blot检测单抗第66-67页
  2.4 讨论第67-68页
  2.5 小结第68-70页
第3章 BIN3 蛋白在弓形虫Chinese I基因型Wh3 虫株中的定位第70-82页
  3.1 材料第70-71页
    3.1.1 主要试剂第70页
    3.1.2 试验动物第70页
    3.1.3 主要仪器第70页
    3.1.4 主要溶液配制第70-71页
  3.2 方法第71-75页
    3.2.1 弓形虫培养第71页
    3.2.2 弓形虫体外诱导第71页
    3.2.3 弓形虫RNA的提取和反转录第71-72页
    3.2.4 Chinese I虫株特异时期鉴定第72-73页
    3.2.5 间接免疫荧光试验第73-74页
    3.2.6 BIN3 蛋白在不同生活时期表达量试验第74-75页
  3.3 结果第75-79页
    3.3.1 弓形虫Chinese I虫株体外诱导形态观察第75-76页
    3.3.2 弓形虫Chinese I虫株特异时期鉴定第76-77页
    3.3.3 间接免疫荧光定位BIN3 蛋白在Chinese I虫株中的位置第77页
    3.3.4 BIN3 蛋白在不同生活时期表达量第77-79页
  3.4 讨论第79-80页
  3.5 小结第80-82页
第4章 BIN3 重组蛋白对弓形虫Chinese I基因型Wh3 株的免疫保护作用第82-96页
  4.1 材料第82-83页
    4.1.1 主要材料第82页
    4.1.2 主要试剂第82页
    4.1.3 主要器材第82-83页
  4.2 方法第83-87页
    4.2.1 弓形虫的培养和分离第83页
    4.2.2 蛋白浓度检测第83-84页
    4.2.3 BIN3 重组蛋白的小鼠免疫试验第84-87页
    4.2.4 Chinese I株弓形虫攻击试验:第87页
  4.3 结果第87-93页
    4.3.1 抗体水平检测结果第87-89页
    4.3.2 细胞因子水平检测结果第89-90页
    4.3.3 流式细胞术分析脾淋巴细胞亚群结果第90-91页
    4.3.4 Chinese I基因型弓形虫攻击小鼠免疫保护试验结果..第91-93页
  4.4 讨论第93-94页
  4.5 小结第94-96页
第5章 Chinese I基因型Wh3 虫株BIN3 基因敲除株构建第96-116页
  5.1 材料第96-97页
    5.1.1 虫株和细胞第96页
    5.1.2 主要试剂第96页
    5.1.3 主要器材第96-97页
  5.2 方法第97-104页
    5.2.1 CRISPR质粒的构建第97-99页
    5.2.2 筛选标记质粒DHFR的构建第99-100页
    5.2.3 BIN3 基因敲除株的构建第100-102页
    5.2.4 BIN3 基因敲除株与野生型虫株体外增殖检测第102页
    5.2.5 噬斑试验第102页
    5.2.6 BIN3 基因敲除株入侵试验第102-103页
    5.2.7 BIN3 基因敲除株逸出试验第103-104页
    5.2.8 BIN3 基因敲除株致病性研究第104页
  5.3 结果第104-112页
    5.3.1 CRISPR-BIN3gRNA质粒的构建第104-105页
    5.3.2 DHFR筛选标记片段的构建第105-107页
    5.3.3 BIN3 基因敲除株鉴定第107-108页
    5.3.4 BIN3 敲除株与野生型虫株体外增殖检测第108-109页
    5.3.5 噬斑试验第109-110页
    5.3.6 BIN3 基因敲除株入侵试验第110页
    5.3.7 BIN3 基因敲除株逸出试验第110-111页
    5.3.8 BIN3 基因敲除株致病性第111-112页
  5.4 讨论第112-113页
  5.5 小结第113-116页
结论第116-118页
参考文献第118-132页
导师简介第132-134页
作者简介第134-136页
致谢第136页

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