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E种肠道病毒HY12毒株的标签病毒拯救及5-UTR对病毒复制的影响

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E种肠道病毒HY12毒株的标签病毒拯救及5-UTR对病毒复制的影响
论文目录
 
中文摘要第1-9页
abstract第9-18页
英文缩写词表第18-19页
引言第19-21页
第一篇 文献综述第21-41页
第1章 肠道病毒研究进展第21-31页
  1.1 肠道病毒形态结构与理化性质第21-22页
  1.2 肠道病毒及其分类第22页
  1.3 肠道病毒基因结构及功能第22-28页
    1.3.1 肠道病毒基因结构第22-23页
    1.3.2 肠道病毒的 5'-UTR和 3'-UTR结构和功能第23-24页
    1.3.3 肠道病毒编码的蛋白及其功能第24-28页
  1.4 肠道病毒感染的流行情况第28-29页
  1.5 肠道病毒感染与复制第29-30页
  1.6 肠道病毒致病机制第30-31页
第2章 肠道病毒疫苗与载体疫苗第31-39页
  2.1 肠道病毒疫苗研究概况第31-35页
    2.1.1 EV-71 灭活疫苗第31-32页
    2.1.2 EV-71 病毒样颗粒(VLP)第32页
    2.1.3 EV-71 弱毒疫苗第32页
    2.1.4 EV-71 亚单位疫苗和合成肽疫苗第32-33页
    2.1.5 CV-A16灭活疫苗第33页
    2.1.6 CV-A16病毒样粒子(VLP)第33页
    2.1.7 EV-71/CV-A16二联疫苗第33-34页
    2.1.8 联合疫苗第34-35页
    2.1.9 脊髓灰质炎病毒(PV)灭活疫苗与弱毒疫苗第35页
  2.2 肠道病毒载体疫苗的研究进展第35-39页
第3章 反向遗传学的研究第39-41页
第二篇 研究内容第41-107页
第1章 HY12-VP2蛋白单克隆抗体制备及抗原表位鉴定第41-57页
  1.1 材料第41-42页
    1.1.1 细胞、病毒、载体、试剂、实验动物第41-42页
    1.1.2 主要仪器第42页
  1.2 方法第42-47页
    1.2.1 HY12-VP2全长基因扩增与重组质粒构建第42页
    1.2.2 HY12-VP2蛋白的表达、纯化及鉴定第42-43页
    1.2.3 单抗制备第43-44页
    1.2.4 HY12-VP2蛋白单抗表位鉴定第44-46页
    1.2.5 亲本HY12-VP2亚细胞定位第46页
    1.2.6 单抗表位的保守性分析第46页
    1.2.7 单抗与不同BEV毒株相对应的表位区域交叉反应性分析第46-47页
  1.3 结果第47-54页
    1.3.1 重组VP2蛋白(GST-VP2)的表达第47页
    1.3.2 抗VP2单克隆抗体的产生及特性第47-48页
    1.3.3 单克隆抗体表位初步鉴定第48-50页
    1.3.4 HY12-VP2蛋白的亚细胞定位第50页
    1.3.5 单抗表位在不同BEV毒株中同源性分析第50-54页
  1.4 讨论第54-55页
  1.5 小结第55-57页
第2章 HA/Flag标签引入HY12病毒结构蛋白重组病毒的拯救及其生物学特性鉴定第57-81页
  2.1 材料第57-58页
    2.1.1 细胞、病毒、载体、试剂、实验动物第57-58页
    2.1.2 主要仪器第58页
  2.2 方法第58-66页
    2.2.1 HY12毒株RNA的提取第58页
    2.2.2 重组标签病毒全长c DNA克隆构建第58-62页
    2.2.3 体外转染MDBK细胞第62页
    2.2.4 IPMA鉴定拯救的重组标签病毒第62页
    2.2.5 Western blot鉴定拯救的重组标签病毒第62-63页
    2.2.6 激光共聚焦第63页
    2.2.7 血清中和实验(SNA)第63页
    2.2.8 电镜观察拯救的病毒粒子第63-64页
    2.2.9 重组标签病毒一步生长曲线和形态学观察第64页
    2.2.10 重组标签病毒遗传稳定性第64-65页
    2.2.11 重组标签病毒与亲本病毒动物感染实验第65页
    2.2.12 病毒核酸检测第65页
    2.2.13 血清抗体检测第65-66页
    2.2.14 统计分析第66页
  2.3 结果第66-79页
    2.3.1 重组标签病毒全长c DNA克隆构建及其鉴定第66-68页
    2.3.2 重组标签病毒的拯救及其鉴定第68-74页
    2.3.3 rHY12-VP1-HA病毒在ICR乳鼠体内的生物学特性第74-79页
  2.4 讨论第79-80页
  2.5 小结第80-81页
第3章 HA标签引入HY12病毒非结构蛋白重组病毒的拯救及其生物学特性鉴定第81-97页
  3.1 材料第81-82页
    3.1.1 细胞、病毒、载体、试剂、实验动物第81-82页
    3.1.2 主要仪器第82页
  3.2 方法第82-86页
    3.2.1 重组标签病毒全长c DNA克隆构建第82-85页
    3.2.2 体外转染MDBK细胞第85页
    3.2.3 IPMA鉴定拯救的重组标签病毒第85页
    3.2.4 Western blot鉴定拯救的重组标签病毒第85页
    3.2.5 激光共聚焦第85页
    3.2.6 电镜观察拯救的病毒粒子第85页
    3.2.7 重组标签病毒生长的一步曲线和蚀斑形态学观察第85页
    3.2.8 重组标签病毒遗传稳定性第85-86页
    3.2.9 重组标签病毒在不同细胞系感染性第86页
    3.2.10 重组标签病毒与亲本病毒动物感染实验第86页
    3.2.11 血清抗体检测第86页
    3.2.12 统计分析第86页
  3.3 结果第86-95页
    3.3.1 重组标签病毒全长c DNA克隆构建及其鉴定第86-88页
    3.3.2 重组标签病毒的拯救及其鉴定第88-95页
  3.4 讨论第95-96页
  3.5 小结第96-97页
第4章 5'-UTR对HY12病毒复制的影响第97-107页
  4.1 材料第97-98页
    4.1.1 细胞、病毒、载体、试剂第97-98页
    4.1.2 主要仪器第98页
  4.2 方法第98-102页
    4.2.1 突变体病毒全长c DNA克隆构建第98-100页
    4.2.2 体外转染BHK-21 细胞第100-101页
    4.2.3 突变体病毒不同时间点的TCID50测定第101页
    4.2.4 突变体病毒Western blot鉴定第101页
    4.2.5 突变体病毒蚀斑实验第101页
    4.2.6 突变体病毒二级结构预测第101页
    4.2.7 统计分析第101-102页
  4.3 结果第102-105页
    4.3.1 突变体病毒全长c DNA克隆构建第102页
    4.3.2 突变体病毒不同时间点TCID50测定第102-103页
    4.3.3 突变体病毒Western blot鉴定第103-104页
    4.3.4 突变体病毒蚀斑形态第104页
    4.3.5 突变体病毒二级结构预测第104-105页
  4.4 讨论第105页
  4.5 小结第105-107页
结论第107-109页
参考文献第109-133页
导师简介第133-135页
作者简介第135-137页
致谢第137页

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