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HeLa细胞核抽出物中一种新的具有H2A.Z置换活性组分的纯化和鉴定

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HeLa细胞核抽出物中一种新的具有H2A.Z置换活性组分的纯化和鉴定
论文目录
 
摘要第1-7页
ABSTRACT第7-13页
第1章 绪论第13-39页
  1.1 表观遗传学的概念第13页
  1.2 表观遗传学的分子机制第13-17页
    1.2.1 DNA甲基化第13-15页
    1.2.2 组蛋白修饰第15页
    1.2.3 染色质重塑第15-16页
    1.2.4 RNA干扰第16-17页
  1.3 染色质重塑复合物第17-32页
    1.3.1 染色质重塑的概念第17-18页
    1.3.2 重塑复合物的分类和作用机制第18-21页
    1.3.3 组蛋白变体的置换第21-32页
  1.4 DNA-PKcs蛋白的结构和功能第32-39页
    1.4.1 DNA-PKcs的结构第32-33页
    1.4.2 DNAPK complex在DNA修复中的作用第33-35页
    1.4.3 DNA-PKcs在癌症发生发展中的作用第35-36页
    1.4.4 DNA-PKcs在P53介导的细胞凋亡中的作用第36-39页
第2章 材料与方法第39-49页
  2.1 实验材料第39-41页
    2.1.1 实验仪器第39-40页
    2.1.2 实验试剂第40-41页
    2.1.3 实验抗体第41页
  2.2 实验方法第41-49页
    2.2.1 细胞培养及处理第41页
    2.2.2 质粒瞬时转染第41-43页
    2.2.4 免疫荧光染色实验第43-44页
    2.2.5 体外重组核小体第44-45页
    2.2.6 体外核小体置换实验第45-46页
    2.2.7 染色质抽提实验第46-47页
    2.2.9 慢病毒包装与感染第47-49页
第3章 实验过程与结果讨论第49-73页
  3.1 体外核小体置换实验模型的建立与验证第49-51页
    3.1.1 引言第49页
    3.1.2 体外重组核小体第49-50页
    3.1.3 体外组蛋白置换模型的有效性验证第50-51页
    3.1.4 小结第51页
  3.2 HeLa细胞核抽出物中含有DNA-PK-cs和 condensin complexII的蛋白组分具有体外置换组蛋白的能力第51-56页
    3.2.1 引言第51-52页
    3.2.2 HeLa细胞中蛋白组分的分离及H2A.Z置换功能鉴定第52页
    3.2.3 对活性组分H2A.Z置换活性的进一步验证第52-53页
    3.2.4 活性组分中蛋白成分的鉴定第53-54页
    3.2.5 不同步骤的纯化方法锁定具有活性的蛋白第54-55页
    3.2.6 小结第55-56页
  3.3 DNA-PKcs和Condensin complexII在细胞内的相互作用第56-61页
    3.3.1 引言第56页
    3.3.2 对活性组分进一步的分离第56-57页
    3.3.3 内源蛋白的免疫共沉淀实验第57-58页
    3.3.4 稳转细胞系中二者的免疫共沉淀实验第58-59页
    3.3.5 损伤模型中DNA-PKcs和 condensin complexII的定位第59-60页
    3.3.6 小结第60-61页
  3.4 纯化的DNA-PKcs和 condensin complexII是否具有体外置换组蛋白的能力第61-66页
    3.4.1 引言第61页
    3.4.2 nCAPH2蛋白对H2A.Z的置换活性很弱。第61页
    3.4.3 DNA-PKcs蛋白在体外具有H2A.Z置换活性第61-63页
    3.4.4 DNA-PKcs通过激酶活性发挥H2A.Z置换功能第63-65页
    3.4.5 DNA-PKcs对 H2A.Z的置换是否具有特异性第65-66页
    3.4.6 小结第66页
  3.5 DNA损伤模型中DNA-PKc对 H2A.Z募集情况的影响第66-73页
    3.5.1 引言第66-67页
    3.5.2 在X射线损伤模型中敲低DNA-PKcs对 H2A.Z募集的影响。第67-70页
    3.5.3 在ASI-U2OS细胞系中敲低DNA-PKcs对 H2A.Z募集的影响第70-71页
    3.5.4 小结第71-73页
第4章 讨论第73-75页
参考文献第75-91页
作者简介及攻读博士学位期间发表的学术成果第91-93页
致谢第93页

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