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剑麻H.11648胚性悬浮细胞培养及hevein基因的转化研究

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剑麻H.11648胚性悬浮细胞培养及hevein基因的转化研究
论文目录
 
摘要第1-6页
Abstract第6-7页
1 引言第11-19页
    1.1 剑麻概况第11-12页
        1.1.1 剑麻的植物学特征第11页
        1.1.2 剑麻的利用价值第11-12页
        1.1.3 剑麻斑马纹病第12页
    1.2 悬浮细胞培养研究第12-15页
        1.2.1 植物组织与细胞培养技术第12-13页
        1.2.2 植物愈伤组织培养第13页
        1.2.3 植物细胞悬浮培养第13-14页
        1.2.4 悬浮细胞植株的再生第14-15页
    1.3 植物遗传转化技术第15-16页
        1.3.1 载体介导转化法:第15页
        1.3.2 DNA直接导入法第15-16页
    1.4 农杆菌介导法介导影响因素第16-17页
        1.4.1 农杆菌菌株及表达载体的构建第16页
        1.4.2 基因活化诱导物的添加第16页
        1.4.3 受体生理状态第16-17页
        1.4.4 农杆菌侵染条件第17页
    1.5 Hevein简介第17页
    1.6 研究目的与意义第17-18页
    1.7 技术路线第18-19页
2 材料与方法第19-31页
    2.1 实验材料第19-22页
        2.1.2 质粒及菌种第19页
        2.1.3 酶和试剂第19-20页
        2.1.4 试剂处理第20-21页
        2.1.5 培养基的配制第21-22页
        2.1.6 实验仪器第22页
    2.2 悬浮细胞系的建立第22-26页
        2.2.1 外植体对愈伤诱导第22页
        2.2.2 激素配比对剑麻愈伤诱导的影响第22-23页
        2.2.3 愈伤继代培养与培养条件第23页
        2.2.4 悬浮细胞系的建立第23-24页
        2.2.5 悬浮细胞系培养参数的测定第24页
        2.2.6 培养方式对悬浮细细胞再生的影响第24-25页
        2.2.7 再生苗的生根移栽第25-26页
    2.3 剑麻悬浮细胞的遗传转化第26-28页
        2.3.1 菌株活化第26页
        2.3.2 工程菌pUC57-Hevein转化剑麻第26-27页
        2.3.3 转化条件的筛选第27-28页
        2.3.4 农杆菌抑制浓度的确定第28页
        2.3.5 抗生素对剑麻胚性愈伤组织生长的影响第28页
        2.3.6 PPT选择压的确定第28页
    2.4 剑麻转化植株的分子检测第28-31页
        2.4.1 剑麻转化植株的PCR检测第28-29页
        2.4.2 转化植株目的基因的反转录PCR检测第29-31页
3 结果与分析第31-46页
    3.1 剑麻胚性细胞悬浮系的建立第31-39页
        3.1.1 不同外植体对愈伤组织诱导的影响第31页
        3.1.2 激素配比对愈伤组织诱导的影响第31-32页
        3.1.3 激素6-BA、2,4-D对细胞生长的影响第32页
        3.1.4 细胞悬浮培养的生长曲线第32-33页
        3.1.5 培养液pH的变化第33-34页
        3.1.6 采用平板培养的方法进行悬浮细胞再生第34页
        3.1.7 采用固液双层培养的方法进行悬浮细胞再生第34-35页
        3.1.8 三种不同的培养方式对悬浮细胞再生的影响第35-37页
        3.1.9 温度对悬浮细胞植板率的影响第37页
        3.1.10 愈伤组织分化与植株再生第37-38页
        3.1.11 再生剑麻苗的生根移栽第38-39页
    3.2 剑麻细胞转化体系的建立第39-44页
        3.2.1 菌液浓度对转化率的影响第39页
        3.2.2 浸染时间对转化的影晌第39-40页
        3.2.3 共培养时间对转化频率的影响第40页
        3.2.4 AS对转化频率的影响第40-41页
        3.2.5 Cef和Car抑制农杆菌浓度的确定第41页
        3.2.6 Cef和Car对剑麻胚性愈伤组织生长的影响第41-43页
        3.2.7 PPT选择压的确定第43-44页
    3.3 转化悬浮细胞的鉴定第44-46页
        3.3.1 转基因植株PCR验证第44页
        3.3.2 转化植株的RT-PCR检测第44-46页
4 讨论第46-49页
    4.1 关于愈伤诱导激素的选择第46页
    4.2 关于悬浮细胞培养过程的优化第46-47页
    4.3 关于悬浮细胞的再生方式选择第47页
    4.4 关于农杆菌介导的遗传转化优化第47-49页
5 结论第49-50页
6 后续研究计划第50-51页
参考文献第51-56页
缩略语表第56-57页
附录第57-59页
硕士期间科研成果及个人简介第59-60页
致谢第60页

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